定量測試定律俗稱朗伯-比爾定律，其成立條件是待測物為均一的稀溶液、氣體等，無溶質(zhì)、溶劑及懸濁物引起的散射；入射光為單色平行光。那么引起朗伯-比爾定律不成立的也基本是上述原因所致。

1、高濃度引起的朗伯-比爾定律的不成立

當吸收物質(zhì)濃度很高時，吸收質(zhì)點距離很近，會互相影響對方的電荷分布，使吸收質(zhì)點對某一特定波長光的吸收能力改變，從而引起定律不成立。在有些情況下當濃度很大時，會引起折射率的變化，也會是定律不成立。同樣在溶液濃度很高時，質(zhì)點距離很近，會引起輻射和吸收的重疊，從而降低整體的吸收能力，使定律不成立。

2、非單色光引起朗伯-比爾定律的不成立

就目前國內(nèi)外分光光度計制造而言，不可能制造出能夠分出單色光的光度計，由單色器分光后的光并非純粹的銳線光，而是有一定寬度的光譜。光經(jīng)過樣品后，非特定波長的光被吸收的很少，進入檢測器，由光信號轉(zhuǎn)為電信號，得出數(shù)據(jù)，如果儀器的光譜帶寬過大會使定律不成立。

3、雜散光過大引起朗伯-比爾定律的不成立

在測試低濃度樣品時，看不出雜光對結(jié)果的影響，但是當測試高濃度樣品時，雜光對測試結(jié)果的影響就很大了。例如：當測試有一定濃度的樣品時，其透過率為：3%，若儀器的雜散光是：0.5%，無疑這對數(shù)據(jù)結(jié)果影響是很大的。所以雜散光過大會使定律不成立。

4、懸濁液和混濁液使朗伯-比爾定律不成立

因為質(zhì)點在測試容器中會不停的運動，因為懸濁液或混濁液的質(zhì)點體積比較大，會直接影響測試結(jié)果的不穩(wěn)定，當質(zhì)點運動到光射的位置會使透過率變小、吸光度變大，無法讀出一個準確的值，自然使定律不成立。

5、非平行光使定律不成立

目前國內(nèi)外儀器所采用的光源都是發(fā)散式的，需經(jīng)過透鏡或凹面鏡聚焦，絕大部分儀器經(jīng)過樣品池時都不是平行的，這樣會引起光的復雜變化，使讀數(shù)不準確，定律不成立。

其它還有很多因素會使定律不成立，如：膠態(tài)溶液、光度精度和散射的影響等，在此僅提供以上主要因素引起的定律不成立的簡單介紹，僅供參考。